Amplifikasi Gene Dengue menggunakan teknik Polymerase Chain Reaction

Windo, Nofel (2005) Amplifikasi Gene Dengue menggunakan teknik Polymerase Chain Reaction. Diploma thesis, Universitas Al Azhar Indonesia.

Text (UAI) - Published Version Available under License Creative Commons Attribution Non-commercial. Download (0B)

Abstract

Di Indonesia, hampir setiap tahun kasus dengue tergolong kejadian luar biasa. Salah satu kendala yang dihadapi adalah ketidakberadaan alat diagnostic produksi lokal serta mahalnya alat diagnostic dari luar. Penelitian ini bertujuan untuk mengamplifikasi gen E dengue menggunakan teknik polymerase chain reaction pada kondisi yang optimal. Tujuan jangka panjang dari penelitian ini adalah untuk menghasilkan bahan farmasi lokal yang dapat digunakan untuk pendeteksian DBD secara dini. Amplifikasi gen E dengue dengan menggunakan pBS-Clone I sebagai DNA cetakan telah berhasil dilakukan dengan komposisi bahan optimal sebagai berikut: Pfu DNA polymerase 2 u, 1x dapar Pfu DNA polymerase, dNTPs 200 uM, pasangan primer E 0,2 uM, dan DNA cetakan 0,6 ng/ul. Kondisi suhu dan waktu setiap tahapan PCR adalah tahap denaturasi awal pada suhu 94 derajat celcius selama 2 menit. Siklus PCR optimal terdiri dari tahap denaturasi pada suhu 94 derajat celcius selama 40 detik, tahap annealing pada suhu 56 derajat celcius selama 30 detik, dan tahap polimerisasi pada suhu 72 derajat celsius selama 2 menit. Polimerisasi akhir dilakukan pada suhu 72 derajat celcius selama 5 menit. Reamplifikasi amplikon gen E dengue pBS-Clone I juga telah berhasil dilakukan pada komposisi bahan, kondisi suhu, dan tenggang waktu optimal yang sama menggunakan pasangan primer Ey2ct, kecuali tahap annealing pada suhu optimal 59 derajat celcius selama 40 detik. Purifikasi hasil amplifikasi gen E dengue pBS-Clone I menghasilkan konsentrasi 95,4 ng/ul dan reamplifikasi amplikon gen E dengue pBS-Clone I dengan konsentrasi 47,7 ng/ul. Hasil amplifikasi ini telah siap untuk dipakai pada tahap penelitian selanjutnya, yaitu subkloning gen E pada vektor yang sesuai.

Actions (login required)

View Item